PRACTICA No. 6: "RECUENTO DE PLAQUETAS CON CÁMARA DE NEUBAUER"

CUENTA DE PLAQUETAS CON CÁMARA DE NEUBAUER

OBJETIVO

Realizar  e interpretar la técnica para la cuenta de trombocitos o plaquetas en la cámara de Neubauer.

FUNDAMENTO

Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito.

Una de las principales funciones de las plaquetas es participar en los mecanismos de la hemostasia (Hemos=sangre, stasis=detención) adhiriéndose entre ellas y a las paredes de los vasos sanguíneos lesionados, para formar así el trombo plaquetario o tapón hemostático.

El líquido diluyente puede ser una solución estéril de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo (85 milimolar) y cloruro de sodio (31 milimolar). Este líquido se provee listo para usar y su conservación es indefinida en refrigerador (2 - 10° C) o puede ser también oxalato de amonio al 1%. El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis por la utilización de un líquido hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-aminobenzoato de dietilaminoetilo.

MATERIAL

v  Pipeta de Thoma para glóbulos rojos (perla roja)

v  Equipo para venopuncion (Tubo lila)

v  Boquilla roja

v  Tubo de goma

v  Tubos de ensayo

v  Papel parafilm

v  Cámara de Neubauer

v  Cubrehematimetro

v  Microscopio

v  Gasas

v  Caja de Petri

v  Papel filtro

SUSTANCIAS

Ø  Alcohol al 70%

Ø  Sangre venosa

Ø   Diluyente de plaquetas

PROCEDIMIENTO

1.    Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA

2.    Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el anticoagulante

3.    Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma. Limpiar la punta con una gasa

4.    Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilución 1:100)

5.    Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto

6.    Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el cubrehematímetro sobre las mesetas

7.    Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cámara, depositándola entre la meseta y el cubrehematímetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos

8.    Colocar la cámara de Neubauer  ya cargada en el interior de una caja de Petri, con papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15 minutos

9.    Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glóbulos  rojos) las plaquetas  que aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes

10. El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y está dividido en 16 cuadritos más pequeños, de tal manera que el número total de estos últimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el recuento de plaquetas.

OBSERVACIONES

Cámara de Neubauer, 10x

Enfocando la cuadricula central se aprecian los 25 cuadros centrales, con una gran cantidad de plaquetas en ellos. Se pueden distinguir solo algunos eritrocitos, mucho mayores que las plaquetas, que desprenden gran brillo

Cámara de Neubauer, 40x

Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayoría u ovalada.

RESULTADOS

Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos,  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm³
Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido se multiplica por el factor de dilución  de la siguiente manera:
N° de plaquetas x mm³ = No. De plaquetas contadas X dilución X 10
Dilución: 1:100
Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm³ ya que el volumen de la cámara es de 0.1 mm³
El número de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los cálculos quedaron así:
No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm³, lo que indica un índice elevado de plaquetas.

VALORES DE REFERENCIA

(Millones de células/mm3)

Hombres y Mujeres:………………………………..150 000 - 450 000

 CONCLUSIÓN

El recuento de plaquetas es de suma importancia y es parte del recuento celular de la sangre como prueba de rutina.

El paciente con un trastorno hemorrágico, clínicamente significativo, acude al médico con algunos tipos de síntomas hemorrágicos, con lo que se puede indicar la parte defectuosa del mecanismo de coagulación, y dentro de estas causas pueden estar la cantidad inadecuada de plaquetas.

La hemorragia de vasos sanguíneos subcutáneos  en piel intacta se puede ver como petequias o equimosis. Cuando se encuentran  equimosis en gran cantidad y sin traumatismo aparente, el trastorno se conoce como Diátesis Hemorrágica y puede ser producida por anormalidades en los vasos sanguíneos, por la disminución en el número de plaquetas o por el mal funcionamiento.

La disminución de plaquetas se denomina Trombopenia o púrpura trombocitopénica y se debe a lo siguiente:

·         Enfermedades autoinmunitarias (el organismo produce anticuerpos contra sus propias plaquetas)

·         Aplasia medular
·         Radioterapia y quimioterapia por cáncer
·         Leucemia aguda
·         Coagulación intravascular diseminada
·         Anemia hemolítica microangiopática
·         Hiperesplenismo
·         Púrpura trombocitopénica idiopática
·         Prótesis de válvula coronaria
·         Transfusión de sangre
·         Choque anafiláctico
·         Algunas infecciones víricas
·         Algunos fármacos

Y el aumento se denomina trombocitosis:

·         Anemia por déficit de hierro

·         Traumatismos
·         Tumores
·         Trombocitosis esencial
·         Policitemia vera
·         Leucemia mieloide crónica
·         Tras esplenectomía
·         Enfermedad de Kawasaki

Bibliografía:

·      Fundamentos y técnicas de análisis hematológicos y citológicos, articulo web consultado el día 8 de marzo de 2012 en: http://html.rincondelvago.com/fundamentos-y-tecnicas-de-analisis-hematologicos-y-citologicos.html

·         Recuento de plaquetas, artículo consultado el día 23 de marzo en http://www.americalab.net/acerca-de-las-pruebas/recuento-de-plaquetas.html

·         Martínez Fragoso, Vicente. Manual de Biometría Hemática. CBTis199, México, 2012. Pp. 30-32