viernes, 9 de marzo de 2012

PRÁCTICA No. 4: "CUENTA DE ERITROCITOS"


CUENTA DE ERITROCITOS
OBJETIVO
Aprender a realizar un recuento de Eritrocitos por milímetro cúbico de sangre, interpretar el resultado, así como adiestrarse en el manejo de la cámara de Neubauer y la pipeta de Thoma
FUNDAMENTO
Para el conteo de eritrocitos, se usan métodos sistemáticos que son más rápidos y precisos, y los métodos manuales.
Todo método manual de recuento celular incluye 3 fases:
ü  Dilución de la sangre
ü  Muestreo de la sangre diluida en un volumen
ü  Recuento de células en ese volumen
Una suspensión celular se caracteriza por presentar un número de partículas microscópicas dispersas en un fluido. Habitualmente será necesario determinar tanto la densidad de las células en la suspensión como el porcentaje de éstas que son viables.
Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre ellas la que utiliza la cámara de Neubauer
Para el conteo de eritrocitos, es necesario diluir la sangre con el líquido de Hayem, en una proporción exacta. Luego se examina en el microscopio con una cantidad pequeña colocada en la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de la cámara y mediante una operación se obtiene el número total.
Para la realización del conteo manual se necesita un líquido de dilución, una cámara de recuento, una pipeta diluidora y un microscopio.
MATERIAL
v  Pipeta de Thoma para glóbulos rojos (perla roja)
v  Equipo para venopuncion (Tubo lila)
v  Boquilla roja
v  Tubo de plástico
v  Tubos de ensayo
v  Papel parafin
v  Cámara de Neubauer
v  Cubrehematimetro
v  Microscopio
v  Gasas
SUSTANCIAS
Ø  Alcohol al 70%
Ø  Sangre venosa
Ø  Liquido de Hayem 
PROCEDIMIENTO
1.    Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA
2.    Colocar el tubo de plástico y la boquilla para aspirar en la pipeta

3.    Llenar la pipeta de glóbulos rojos con sangre hasta la marca 0.5 para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilución será 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Si la sangre se pasa de la marca, se puede absorber con gasa el excedente
4.    Introducir la pipeta en el tubo o frasquito que contiene el diluyente (Hayem) y llenar de líquido de dilución hasta la marca de 101
5.    Se tapa la punta con papel parafin y se coloca en un rotador automático o se hace rotar manualmente de 2-3 minutos
6.    Destapar la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por capilaridad se llene exactamente. Dejar 2 minutos  que los eritrocitos se sedimenten
7.    Colocar en la platina del microscopio y enfocar la cuadricula a 10x. luego con el objetivo de 40x contar sobre el cuadro grande central de la cámara solo en 5 cuadrados pequeños: uno central y cuatro angulares (80 cuadritos del total)
8.    En el recuento se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera las líneas limitantes superior e izquierda en el cuadro pequeño de recuento y no se consideran los que estén en los límites inferior y derecho.  
OBSERVACIONES
Cámara de Neubauer, 10x
El rayado de la cámara de Neubauer cubierta de miles de eritrocitos, que destacan por su forma redonda y gran cantidad.
Cámara de Neubauer, 40x
Enfocando el cuadro central de los cuadros pequeños, se aprecian claramente los 16 cuadritos pequeños donde se tienen que contar los eritrocitos que hay en ellos.
RESULTADOS
Los recuentos de eritrocitos  se expresan como concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre, que es 1mm3
Después de contar los hematíes de los 5 cuadrados pequeños, se suman y con dicha cantidad de hace el siguiente cálculo:
N° de hematíes x mm3 = altura x dilución x área  
N° de hematíes x mm3 = 1/10 x 1/200 x 1/5 = 1/10 000
N° de hematíes x mm3 = hematíes contados x 10 000

En el análisis hecho, el número de eritrocitos fue de 491, que al multiplicarse por 10 000 daba como resultado 4 910 000/mm3, lo que indica un índice normal pues el paciente era una mujer de 11 años de edad.
VALORES DE REFERENCIA
(Millones de células/mm3)
Hombres:………………………………..4 500 000-5 500 000
Mujeres:…………………………...…….4 000 000-5 000 000
Niños (4 años):……….........................4 200 000-5 200 000
Lactantes (1-6 meses):....…………….3 800 000-5 200 000
Recién nacidos:………………………..5 000 000-6 000 000

CONCLUSIÓN
Los eritrocitos o glóbulos rojos son células de color amarillento, con la forma  de un disco bicóncavo, sin núcleo y contienen un pigmento llamado hemoglobina que les otorga su característico color.
Estos se forman constantemente en la medula ósea, en el cráneo, las costillas, las vértebras y el esternón, en un proceso conocido como eritropoyesis. Viven aproximadamente 120 días y al envejecer son destruidos por las células reticuloendoteliales del  hígado, la medula ósea y el bazo.
La falta de núcleo le confiere la virtud de acarrear oxigeno sin consumir nada de él.  
La pipeta de Thoma para glóbulos rojos está constituida por dos porciones capilares y un bulbo central. El tubo capilar inferior está dividido en 10 partes iguales con marcas de 0.5 y 1.0. En el interior del bulbo existe una perlita de plástico roja para favorecer la mezcla de sangre con el líquido y en el capilar superior hay una marca de 101.
El líquido de dilución no solamente debe de diluir los eritrocitos hasta cifras legibles, sino que también permita identificarlos y que destruya otros elementos celulares que no son de interés en este momento. En general se puede usar cualquier solución isotónica como diluyente y pueden ser:
Y  Soluciones de Gower
Y  Soluciones de Dace
Y  Solución salina de NaCl al 0.9%
Y  Liquido de Hayem, el cual está formado de 5g de NaCl, 2.5g de Na2SO4, 2.5g de MgCl2 y agua destilada para un litro. Este último es el más usado.
Es muy importante observar que en la cámara de Neubauer las áreas de recuento de eritrocitos y linfocitos son diferentes.
Los glóbulos rojos se cuentan en las áreas coloreadas de rojo, mientras que los glóbulos blancos se cuentan en las áreas coloreadas de azul. 
Para realizar el conteo se enfoca con el objetivo 40x, y se localiza el cuadro central con el condensador bajo y luz débil.
Para proceder al recuento, que se lleva a cabo en los cuadrados pequeños del retículo marcado en color rojo, contando las células en cada cuadro, en barrido o fila.







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