PRÁCTICA No.3: "COPROPARASITOSCÓPICO: MÉTODO DE CONCENTRACIÓN-FLOTACIÓN DE FAUST"

COPROPARASITOSCÓPICO: MÉTODO DE CONCENTRACIÓN-FLOTACIÓN DE FAUST

Esta práctica se llevó a cabo el día jueves 8 de septiembre 2011, en las instalaciones del laboratorio para prácticas de análisis clínicos del CBTis 199, como parte del programa de 3º semestre para la preparación de la carrera de Laboratorista Clínico, en su subdivisión de técnicas parasitológicas

FUNDAMENTO

En este método se utiliza solución de Zn, cuya densidad específica es de 1.180 (33%), que conforma un medio de densidad más alta que la de los huevos:

Necátor 1.055

Tricocéfalo 1.150

Áscaris fértil 1.110

Y facilita que los huevos livianos de estos helmintos, con menor peso específico que la solución, se concentren y floten.

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo  una solución acuosa  de sulfato de Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utiliza diluye y lava materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos.

MATERIAL: v  Portaobjetos v  Cubreobjetos v  Vaso de precipitados v  Tubos de ensayo v  Asa v  Embudo v  Gasas v  Aplicadores de madera v  Centrifuga v  Microscopio v  Abatelenguas

SUSTANCIAS:

Ø  Solución acuosa de sulfato de zinc

Ø  Solución de yodo
Ø  Muestra biológica: heces fecales frescas

PROCEDIMIENTO

1.    Tomar con el abatelenguas una porción de materia fecal para disolver en 10 partes de agua destilada

2.    Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de ensayo, ayudándose con un embudo pequeño

3.    Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 minuto

4.    Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento

5.    Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo

6.    Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de zinc al 33%. Mezclar bien la solución con el sedimento.

7.    Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm

8.    Tomar con el asa de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido.

9.    Colocarlos en un portaobjetos y mezclar con 1-2 gotas de yodo-lugol

10. Colocar el cubreobjetos y observar al microscopio.

OBSERVACIONES

Muestra 1: Frotis teñido, 10x

Se distingue a la 1 y en el centro dos estructuras de forma irregular que corresponden a residuos de grasas

Muestra 1: Frotis teñido, 10x

Se distinguen en este par de imágenes nuevamente grasas y el de la derecha aparece un residuo vegetal, ambos son residuos de alimentos

Muestra 1: Frotis teñido, 10x

Sobresale a partir de las 10 una fibra vegetal, que tomó una coloración roja gracias al yodo y la 1 se encuentran trozos de grasas y un jabón

Muestra 1: Frotis teñido, 10x

A las 11 se observan fibras de tejido conectivo y a las 4 cuatro más residuos vegetales

RESULTADOS

Como puede verse, el resultado para huevecillos de parásitos resulto negativo.

Lo que se encontró en mayor cantidad fueron restos de comida, fibras de tejido, grasas con mucha frecuencia y jabones, quistes o huevecillos como se esperaba.

CONCLUSIONES

Las técnicas de flotación, sedimentación y conteo son algunas de los métodos  utilizados para la determinación de parásitos intestinales como parte del diagnóstico de protozoarios, trematodos, cestodos, nematodos y ocasionalmente, algunos artrópodos.

Uno de los más conocidos y usados es el método de Faust o de flotación en sulfato de zinc (ZnSO₄.)

Es usado para detectar parásitos del tubo digestivo. Las especies que parasitan al hombre son Necator americanus, Ancylostoma duodenale y, en menor medida, Ancylostoma ceylonicum.

Los anquilostomas cortan la pared intestinal del hospedador, alimentándose de la sangre de éste. Los adultos se aparean dentro del intestino del huésped, y la hembra produce miles de huevos que salen con las heces. La infección se realiza por la penetración de la larva a través de la piel o por ingesta de aguas contaminadas con materia fecal

Este método aprovecha la densidad. Así, quedaron depositados los huevecillos en el fondo de la muestra, porque su densidad es mayor al agua.  El ZnSO₄ hace que los huevecillos se eleven a la superficie, aprovechando el mismo principio de densidad.

La función de la centrifuga en esta práctica fue de suma importancia, puesto que utiliza la fuerza centrípeta para separar sustancias de diferentes densidades.

Se puede predecir el resultado de la positividad de manera macroscópica cuando en el tubo de ensayo con la solución de sulfato de zinc, la cantidad y el tamaño de las partículas es grande, se puede decir que sospechosamente será positivo.

De lo contrario, si las partículas son muy pequeñas, lo más probable es que sea negativo.

El método de Faust es el más adecuado para determinar la existencia de agentes infecciosos no solo en las heces fecales, sino también en las aguas residuales o negras.

Por eso es importante no beber agua sucia y lavarse las manos antes de comer y después de ir al baño.



Fuentes consultadas:

·         Técnicas coproparasitoscópicas, consultado el día 9 de septiembre 2011 en http://html.rincondelvago.com/parasitologia_5.html

·         Brown, H. W. Parasitología Clínica. Edit. Interamericana. México, 1985. Pp. 338-339