TÉCNICAS DE CUENTA DE HUEVOS EN HECES: TÉCNICA DE STOLL
Esta práctica se llevó a cabo el día jueves 29 de septiembre 2011, en las instalaciones del laboratorio para prácticas de análisis clínicos del CBTis 199, como parte del programa de 3º semestre para la preparación de la carrera de Laboratorista Clínico, en su subdivisión de técnicas parasitológicas.
OBJETIVO
Aprender a realizar la técnica cuantitativa de Stoll para el conteo y cálculo de la cantidad de huevecillos de helmintos.
FUNDAMENTO
En un examen coproparasitoscópico, es de gran utilidad la identificación de los parásitos que pudieran existir en la muestra de heces fecales, pero más importante aún es poder establecer en qué cantidad está el parasito y determinar de esta manera la intensidad de la infestación.
Por lo general, la sintomatología de las enfermedades parasitarias se correlaciona con el número de parásitos presentes. Para esto, es de gran utilidad conocer la eliminación diaria de huevecillos de varias especies de helmintos, y la forma de los quistes de los diversos protozoos que se pueden encontrar en el tracto digestivo.
Por tanto, se hace una estimación del número de parásitos al contar el número de huevos en una cantidad conocida de heces y al calcular el número de gusanos que se requieren para producir dicho número.
Los mejores resultados se logran cuando las cuentas se realizan en muestras sucesivas obtenidas en un periodo de varios días, de manera que se pueda determinar el promedio diario de liberación de huevos.
Uno de los métodos más usados es el de Stoll. Este se basa en los principios de saponificación, homogenización y aclaración. El NaOH 0.1 N al ponerse en contacto con las grasas de las heces se saponifica, hace que los huevos de los parásitos sean menos pegajosos, desinfecta y desodoriza la muestra
MATERIAL: v Tubos de ensaye cónicos de 15 ml v Aplicadores de madera v Perlas de vidrio v Portaobjetos v Cubreobjetos v Microscopio SUSTANCIAS: Ø Solución de hidróxido de sodio (NaOH) 0.1 N Ø Muestra biológica: heces fecales frescas |
PROCEDIMIENTO
1. Se llena una probeta graduada de 100 ml con 56 ml de hidróxido de sodio 0.1 N.
En esta práctica, para fines didácticos, se usara en lugar de probeta un tubo de plástico cónico de 15 ml, por lo que se llenara con 5.6 ml de NaOH
6. Con aumento de 40X se cuentan los huevos de toda la preparación.
OBSERVACIONES
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| Frotis, 10x Sobresale una fibra de residuo vegetal en todo el campo. Junto a la mancha café, se observa lo que probablemente es un quiste de E. histolytica.  |
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| Frotis, 10x Se distinguen en estas dos imágenes diversos residuos de fibras vegetales. En la primera tiene forma de una pequeña red. La segunda es de color azul. |
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| Frotis, 40x Al acercar el primer campo, se descartó la presencia del quiste y se determinó que era un residuo vegetal |
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| Frotis, 40x A las 12 dos grandes placas de celulosa vegetal y debajo de ellas una gran cantidad de cristales de ácidos grasos. |
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| Frotis, 40x A las 7 se distinguen dos fibras espirales de restos de comida. |
RESULTADOS
En esta práctica, el resultado para huevecillos de parásitos resulto negativo.
Se encontraron varias fibras vegetales, restos de comida, celulosa y cristales de ácido graso.
Sin embargo, en el caso de resultar positivo, y de llevar a cabo con los 56 ml de NaOH se efectúan dos cuentas utilizando partes separadas de 0.075ml de la suspensión (total= 0.15ml) y se realizan los siguientes cálculos:
1. La disolución fecal original es de 1 en 15 (4ml/60ml). Como se contaron los huevos en un volumen total de 0.15 ml, el número total de éstos en 1ml de heces se encuentran al multiplicar la cuenta total por 100 (1/5 x 0.15 x 100=1).
2. Suponiendo que el promedio de una persona rebasa los 100 g de heces por día, es posible calcular el número de huevos por día multiplicando el resultado por 100 (o la cuenta de la suspensión original por 10 000).
3. Para determinar el número de parásitos hembras presentes, se divide el número diario de huevecillos que hay en las heces entre el número promedio de huevecillos de las distintas hembras de helmintos parásitos (ver más adelante en conclusión)
4. Se encuentra la cantidad total de parásitos al multiplicar por dos los resultados encontrados en el paso tres, ya que se supone que en cualquier infestación hay un parásito macho por cada parásito hembra.
CONCLUSIÓN
La técnica de Stoll es un método de dilución en el cual se suspenden 4 ml de materia fecal se suspenden en 60 ml de NaOH 0.1 N y se cuenta el número de huevecillos en un volumen estándar de suspensión.
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| HUEVECILLO DE NECATOR AMERICANUS |
Una de las grandes ventajas de este procedimiento, es que no es indispensable tener el equipo de Stoll completo, pues si no se dispone de este, se puede realizar en equipo de laboratorio convencional.
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| HUEVECILLO DE ASCARIS |
El concepto básico de este procedimiento es contar los huevecillos en un volumen conocido de concentración conocida de heces en NaOH 0.1 N y calcular el número por gramo de heces.
El conteo de los huevecillos se basa en el principio de que por cada macho hay una hembra, y se usan para calcular los siguientes parámetros:
Hembra de la especie Necator americanus: 7000 huevos/día
Hembra de la especie Ascaris lumbricoides: 200000 huevos /día
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| HUEVECILLO DE TRCHURIS TRICHUIRA |
Hembra de la especie Trichuris trichuira: 7500 huevo/día
Algunos laboratoristas creen que se deben utilizar los factores de correlación de la consistencia de las heces para obtener resultados más exactos. Para esto, se debe multiplicar el número que se obtiene en el paso uno por el factor apropiado.
Heces formadas= 1
Blandas formadas= 1.5
Blandas diarreicas= 3
Fluidas diarreicas= 4
Muy líquidas= 5
Estos factores dependen de la cantidad de agua que las muestras contengan. Si se encuentran quistes únicamente se reportan, sin cuantificarse.
En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo (trofozoíto o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
Puede ser necesario que las heces duras se dejen reposar con NaOH durante varias horas o durante una noche en el refrigerador para que se ablanden.
Sobre los resultados tienen influencia muchas variables, como dieta, mala digestión, los ciclos de producción de huevos y la consistencia de las heces
Fuentes consultadas:
· Manual de laboratorio de parasitología, documento formato pdf, consultado el día 28 de septiembre en http://es.scribd.com/doc/5275620/MANUAL-DE-LABORATORIO-DE-PARASITOLOGIA
· Brown, H. W. Parasitología Clínica Edit. Interamericana. México, 1985. Pp. 339-340
- Técnica de Stoll, consultado el día 28 de septiembre en http://usuarios.multimania.es/paraelsa/manual04/practica-8.htm
